Image

Hormonaaliset lääkkeet ruoassa

Hormonit ovat tiettyjen solujen tuottamia orgaanisia yhdisteitä, jotka on suunniteltu ohjaamaan kehon toimintoja, niiden säätelyä ja koordinaatiota. Korkeammilla eläimillä on kaksi säätelyjärjestelmää, joiden avulla keho sopeutuu jatkuviin sisäisiin ja ulkoisiin muutoksiin. Yksi niistä on hermosto, joka välittää nopeasti signaaleja (impulssien muodossa) hermoverkon ja hermosolujen kautta; toinen on hormonitoimintaa, joka suorittaa kemiallista säätelyä veren kuljettamien hormonien avulla ja vaikuttaa kudoksiin ja elimiin, jotka ovat kaukana niiden erityspaikasta. Kemiallinen viestintäjärjestelmä on vuorovaikutuksessa hermoston kanssa; Jotkut hormonit toimivat siten välittäjinä (välittäjinä) hermoston ja stimulaatioon reagoivien elinten välillä. Joten hormonit säätelevät kaikkien kehon solujen toimintaa. Ne vaikuttavat ajattelun ja fyysisen liikkuvuuden, fysiikan ja pituuden terävyyteen, määrittävät hiusten kasvun, äänensävyn, sukupuolen halun ja käyttäytymisen. Hormonaalisen järjestelmän ansiosta ihminen voi sopeutua voimakkaisiin lämpötilan vaihteluihin, ruoan liialliseen tai puuttumiseen, fyysiseen ja henkiseen stressiin. Hormonaalisen tason nousu tai lasku yhdessä hormonireseptorien herkkyyden vähenemisen tai lisääntymisen kanssa voi johtaa hormonaalisiin sairauksiin.

Steroidihormonit ovat ryhmä fysiologisesti aktiivisia aineita (sukupuolihormonit, kortikosteroidit jne.), Jotka säätelevät elintärkeitä prosesseja eläimillä ja ihmisillä. Selkärankaisilla steroidihormonit syntetisoidaan kolesterolista lisämunuaiskuoressa, kivesten Leydig-soluissa, munasarjojen follikkelissa ja keltarauhasessa sekä istukassa. Korkean lipofiilisyyden vuoksi steroidihormonit diffundoituvat suhteellisen helposti plasmamembraanien kautta vereen ja tunkeutuvat sitten kohdesoluihin.

Hormonaaliset häiriöt liittyvät krooniseen dysbioosiin, hormonaalisiin tai hormoneja estäviin ravintolisiin ja pysyviin ortomolekyylipuutoksiin..

Suurin osa ulkomaisista valmistajista käyttää geneettisesti muunnettua rehua ja myös pistää hormoneja eläimen kehoon useita kuukausia ennen teurastusta lihaskudoksen kasvun stimuloimiseksi.

Monet eläinlääkkeet aiheuttavat vakavan riskin ihmisten terveydelle, kun niitä otetaan kroonisesti. Joten esimerkiksi hormonaalisilla lääkkeillä, jotka ovat erityisen vaarallisia lasten ja nuorten terveydelle, on genotoksisia, immunotoksisia, embryotoksisia ja karsinogeenisia ominaisuuksia (rintasyöpä, eturauhassyöpä), aiheuttavat hormonaalista epätasapainoa, aiheuttavat autoimmuuni- ja allergisia sairauksia ja johtavat ihmisen lisääntymistoiminnan heikkenemiseen., aiheuttaa häiriöitä sikiön ja lapsen kehityksessä.

Hormonaalisesti vaikuttavien maatalouseläinten kasvun stimulantit, erityisesti synteettiset ei-steroidiset yhdisteet, kuten dietyylistilbestroli, eivät tuhoudu eläinten kehossa, ja niiden jäännösmäärä säilyy pitkään lihavalmisteissa. Kun käytetään dietyylistilbestrolia eläinten lihotukseen, lihan kosteus- ja rasvapitoisuus kasvaa. Useimmissa maailman maissa dietyylistilbestrolia ei käytetä karjanhoidossa karsinogeenisten ominaisuuksiensa vuoksi.

Dietyylistilbestroli (DES tai stilbestroli), voimakas synteettinen sukupuolihormoni, joka lisättynä eläinten rehuihin tai suoralla injektiolla voi merkittävästi lisätä eläimen painoa ja vähentää samalla kulutetun rehun määrää, kiellettiin Yhdysvalloissa vuonna 1979, kun sitä yhdistävät tutkimustiedot julkaistiin. aine, jolla on syöpä ja hedelmättömyys ihmisillä. Mutta jo vuosi virallisen kiellon jälkeen, Food and Drug Administration (FDA) ja Yhdysvaltain maatalousministeriö tutkivat yksityiskohtaisesti, että yli 200 000 nautaa injektoitiin laittomasti DES: ään kaikkialla maassa. Tätä lääkettä käytetään edelleen laillisesti lihakarjan kasvatuksessa Meksikossa, josta eläimet viedään sitten Yhdysvaltoihin..

Vaikka DES olisi kielletty, lihateollisuudessa ei ole pulaa hyväksytyistä hormonaalisista kasvun stimulanteista. Joten tästä päivästä lähtien melengestroliasetaattia (MGA, joka antaa painonnousua 6 prosenttia tehokkaammin kuin kielletty DES), zeranolia, progesteronia, testosteronipropionaattia, furatsolidonia, trinitro-4-hydroksifenyyliarseenihappoa, natriumarsanilaattia ja tylosiinifosfaattia käytetään laajasti.... Arseeni, toinen pahamaineinen karsinogeeni, lisätään eläinten rehuihin erilaisissa arseeniyhdisteissä, joita käytetään myös kasvunedistäjinä. Lisäksi arseeni on osa desinfiointiliuoksia, joihin eläimet "kastetaan" punkkien ja muiden loisten poistamiseksi.

Monet huumeet ovat kiellettyjä Venäjän federaatiossa ja Euroopan unionin maissa, koska niiden käyttö karjanhoidossa ja siipikarjan kasvatuksessa johtaa näiden aineiden kertymiseen eläintuotteisiin. Heidän joukossa:

Stilbeneenit, jotka sisältävät dietyylistilbestrolia, dienoestrolia ja heksoestrolia, ovat erittäin tehokkaita synteettisiä anabolisia steroideja, joilla on voimakas estrogeeninen aktiivisuus. Stilbeneillä on osoitettu olevan voimakkaita syöpää aiheuttavia ominaisuuksia..

Etinyyliestradioli on synteettinen hormonin kaltainen aine, jolla on estrogeenistä vaikutusta.

Testosteroni on endogeeninen miespuolinen (androgeeninen) sukupuolihormoni, jolla on anabolisia vaikutuksia. Testosteronia tuotetaan urosgonadeissa ja se on välttämätöntä lisääntymisjärjestelmän normaalille toiminnalle, toissijaisten seksuaalisten ominaisuuksien muodostumiselle. Jatkuva testosteronituotanto alkaa murrosiän aikana ja jatkuu seksuaalisen toiminnan sukupuuttoon asti. Testosteroni stimuloi proteiinisynteesiä kehossa, ja tämä puolestaan ​​johtaa ruumiinpainon, erityisesti lihasten, lisääntymiseen. Testosteronin systemaattinen käyttö eläimen lihasmassan kasvun stimuloimiseksi on kielletty sekä Venäjän federaatiossa että Euroopan maissa. Eksogeenisen testosteronin on osoitettu aiheuttavan riskejä ihmisten terveydelle, mukaan lukien eturauhassyöpä

Metyylitestosteroni on synteettinen anabolinen steroidi, jolla, kuten testosteronilla, on androgeenista vaikutusta. Metyylitestosteronia määrätään miehille, joilla on seksuaalista alikehitystä, verisuoni- ja hermostohäiriöitä. Lääkkeen käyttö sopivilla indikaatioilla ja sopivina annoksina johtaa seksuaalisen toiminnan lisääntymiseen, alikehittyneiden sukupuolielinten kasvun stimulointiin ja toissijaisten seksuaalisten ominaisuuksien kehittymiseen. Lääkettä suositellaan myös miehille, joilla on impotenssi ylityön vuoksi, ja naisille, joilla on metriitti ja vaginiitti. Metyylitestosteronin käyttö karja- ja siipikarjatuotannossa johtaa sen kertymiseen eläinperäisiin tuotteisiin ja on kielletty Venäjän federaatiossa ja Euroopan unionin maissa..

19-nortestosteroni on synteettinen anabolinen steroidi, jolla on androgeenista vaikutusta. Joitakin 19-nortestosteroniestereitä käytetään eläinlääketieteessä käyttöaiheiden mukaan lääkinnällisiin tarkoituksiin, mutta 19-nortestosteronin systemaattinen käyttö eläinten lihasmassan kasvun stimuloimiseksi on kielletty Venäjän federaatiossa ja Euroopan unionin maissa..

Klenbuteroli kuuluu b-agonisteiksi kutsuttujen aineiden ryhmään. Β-agonistien tiedetään stimuloivan lihasmassaa ja säätelevän rasva- ja lihaskudoksen suhdetta kasvatettaessa tuotantoeläimiä ja siipikarjaa. On todistettu, että klenbuteroli ja muut β-agonistit voivat ruoan kanssa käytettynä aiheuttaa takykardian ja verenpaineen jyrkän nousun. Klenbuterolin ja muiden b-agonistien kroonisen saannin myötä ihmiskehossa voidaan havaita aineenvaihduntahäiriöitä.

Zeranoli on erittäin tehokas synteettinen anabolinen aine, jolla on estrogeenisiä ominaisuuksia. Mykotoksiinitereralenonilla, jota joskus kutsutaan "kasvihormoniksi", on kolme kertaa vähemmän estrogeenista aktiivisuutta kuin synteettisellä zeranolilla. Anabolisten ominaisuuksiensa vuoksi zeranolia käytetään laittomasti karjanhoidossa lihasten kasvun stimuloimiseksi ja rehun imeytymisen parantamiseksi. Zeranoli voi aiheuttaa merkittävän riskin ihmisten terveydelle. Zeranoli pääsee ihmiskehoon eläintuotteilla, ja se voi aiheuttaa lasten ja nuorten hyperestrogenismin, hedelmättömyyden ja kehityshäiriöiden kliinisiä oireita. Zeranolin käyttö karjanhoidossa on kielletty.

Trenboloni on erittäin tehokas synteettinen anabolinen steroidi, jolla on myös vahva androgeeninen aktiivisuus. Trenboloni indusoi solujen transformaatiota ja voi aiheuttaa riskin ihmisten terveydelle. Trenbolonin käyttö karjankasvatuksessa ja siipikarjan kasvatuksessa johtaa sen kertymiseen eläintuotteisiin ja on kielletty sekä Venäjän federaatiossa että Euroopan unionin maissa..

Eläinlääkkeiden jäämien määrittämiseksi käytetään instrumentaalisia fysikaalis-kemiallisia analyysimenetelmiä, kuten korkeapaineinen nestekromatografia (HPLC) ja kaasukromatografia-massaspektrometria (GC-MS). Nämä menetelmät edellyttävät kuitenkin kalliiden laitteiden käyttöä, jotka vaativat erittäin ammattitaitoista huoltoa. Viime aikoina eläinlääkkeiden jäämien seulomiseksi on käytetty kätevää ja nopeaa entsyymiin liittyvää immunosorbenttimääritystä (ELISA), joka on virallinen menetelmä eläintuotteiden valvomiseksi EU-maissa (direktiivi 93/257 / ETY). Venäjän federaation maatalousministeriön eläinlääkintävirasto hyväksyi helmikuussa 2000 ohjeet seitsemän tärkeimmän synteettisen hormonaalisen valmisteen kvantitatiiviseen määrittämiseen eläinperäisissä elintarvikeraaka-aineissa RIDASCREEN®-testijärjestelmien avulla.

Elintarvikeraaka-aineiden ja eläinperäisten elintarvikkeiden, joita myydään EU-maissa ja Venäjän federaatiossa, on oltava täysin vapaita hormonaalisten lääkkeiden, beeta-agonistien ja joidenkin antibioottien (esimerkiksi kloramfenikolin ja nitrofuraanien) jäämistä. Terapeuttisiin tarkoituksiin käytettäviä eläinlääkkeitä olisi käytettävä edellyttäen, että eläimet vanhenevat pakollisesti ennen teurastusta, kunnes eläinlääkkeiden jäännökset poistuvat kokonaan eläimen kehosta..

2. Ohjeet hormonaalisten jäännösmäärien määrittämiseksi eläintuotteista GLC-menetelmällä

Hormonaalisten lääkkeiden määrittäminen elintarvikkeissa

Hormonaaliset lääkkeet ruoassa. Ohjeet hormonaalisten jäännösmäärien määrittämiseksi eläintuotteissa. Kemialliset menetelmät hormonien havaitsemiseksi ja tunnistamiseksi. Perusproteiini ja peptidihormonit. Steroidien merkitykselliset nimet.

OtsikkoKemia
Näytäessee
KieliVenäjän kieli
Lisäyspäivämäärä22.10.2011
Tiedoston koko509,9 K
  • katso teoksen teksti
  • voit ladata teoksen täältä
  • täydelliset tiedot työstä
  • koko luettelo vastaavista teoksista

Lähetä hyvää työtä tietokannassa on yksinkertaista. Käytä alla olevaa lomaketta

Opiskelijat, jatko-opiskelijat, nuoret tutkijat, jotka käyttävät tietopohjaa opinnoissaan ja työssään, ovat sinulle erittäin kiitollisia.

Lähetetty http://www.allbest.ru/

Hormonaalisten lääkkeiden määrittäminen elintarvikkeissa

  • 1. Hormonaaliset lääkkeet ruoassa
  • 2. Ohjeet hormonaalisten jäännösmäärien määrittämiseksi eläintuotteista GLC-menetelmällä
  • 3. Kemialliset menetelmät hormonien havaitsemiseksi ja tunnistamiseksi ohutkerros- ja paperikromatogrammeilla ja elektroforamareilla
  • 4. Luettelo tärkeimmistä proteiini- ja peptidihormoneista
  • 5. Steroidien tärkeät nimet

hormonaalinen lääke ruoka steroidi

1. Hormonaaliset lääkkeet ruoassa

Hormonit ovat tiettyjen solujen tuottamia orgaanisia yhdisteitä, jotka on suunniteltu ohjaamaan kehon toimintoja, niiden säätelyä ja koordinaatiota. Korkeammilla eläimillä on kaksi säätelyjärjestelmää, joiden avulla keho sopeutuu jatkuviin sisäisiin ja ulkoisiin muutoksiin. Yksi niistä on hermosto, joka välittää nopeasti signaaleja (impulssien muodossa) hermoverkon ja hermosolujen kautta; toinen on hormonitoimintaa, joka suorittaa kemiallista säätelyä veren kuljettamien hormonien avulla ja vaikuttaa kudoksiin ja elimiin, jotka ovat kaukana niiden erityspaikasta. Kemiallinen viestintäjärjestelmä on vuorovaikutuksessa hermoston kanssa; Jotkut hormonit toimivat siten välittäjinä (välittäjinä) hermoston ja stimulaatioon reagoivien elinten välillä. Joten hormonit säätelevät kaikkien kehon solujen toimintaa. Ne vaikuttavat ajattelun ja fyysisen liikkuvuuden, fysiikan ja pituuden terävyyteen, määrittävät hiusten kasvun, äänensävyn, sukupuolen halun ja käyttäytymisen. Hormonaalisen järjestelmän ansiosta ihminen voi sopeutua voimakkaisiin lämpötilan vaihteluihin, ruoan liialliseen tai puuttumiseen, fyysiseen ja henkiseen stressiin. Hormonaalisen tason nousu tai lasku yhdessä hormonireseptorien herkkyyden vähenemisen tai lisääntymisen kanssa voi johtaa hormonaalisiin sairauksiin.

Steroidihormonit ovat ryhmä fysiologisesti aktiivisia aineita (sukupuolihormonit, kortikosteroidit jne.), Jotka säätelevät elintärkeitä prosesseja eläimillä ja ihmisillä. Selkärankaisilla steroidihormonit syntetisoidaan kolesterolista lisämunuaiskuoressa, kivesten Leydig-soluissa, munasarjojen follikkelissa ja keltarauhasessa sekä istukassa. Korkean lipofiilisyyden vuoksi steroidihormonit diffundoituvat suhteellisen helposti plasmamembraanien kautta vereen ja tunkeutuvat sitten kohdesoluihin.

Hormonaaliset häiriöt liittyvät krooniseen dysbioosiin, hormonaalisiin tai hormoneja estäviin ravintolisiin ja pysyviin ortomolekyylipuutoksiin..

Suurin osa ulkomaisista valmistajista käyttää geneettisesti muunnettua rehua ja myös pistää hormoneja eläimen kehoon useita kuukausia ennen teurastusta lihaskudoksen kasvun stimuloimiseksi.

Monet eläinlääkkeet aiheuttavat vakavan riskin ihmisten terveydelle, kun niitä otetaan kroonisesti. Joten esimerkiksi hormonaalisilla lääkkeillä, jotka ovat erityisen vaarallisia lasten ja nuorten terveydelle, on genotoksisia, immunotoksisia, embryotoksisia ja karsinogeenisia ominaisuuksia (rintasyöpä, eturauhassyöpä), aiheuttavat hormonaalista epätasapainoa, aiheuttavat autoimmuuni- ja allergisia sairauksia ja johtavat ihmisen lisääntymistoiminnan heikkenemiseen., aiheuttaa häiriöitä sikiön ja lapsen kehityksessä.

Hormonaalisesti vaikuttavien maatalouseläinten kasvun stimulantit, erityisesti synteettiset ei-steroidiset yhdisteet, kuten dietyylistilbestroli, eivät tuhoudu eläinten kehossa, ja niiden jäännösmäärä säilyy pitkään lihavalmisteissa. Kun käytetään dietyylistilbestrolia eläinten lihotukseen, lihan kosteus- ja rasvapitoisuus kasvaa. Useimmissa maailman maissa dietyylistilbestrolia ei käytetä karjanhoidossa karsinogeenisten ominaisuuksiensa vuoksi.

Dietyylistilbestroli (DES tai stilbestroli), voimakas synteettinen sukupuolihormoni, joka lisättynä eläinten rehuihin tai suoralla injektiolla voi merkittävästi lisätä eläimen painoa ja vähentää samalla kulutetun rehun määrää, kiellettiin Yhdysvalloissa vuonna 1979, kun sitä yhdistävät tutkimustiedot julkaistiin. aine, jolla on syöpä ja hedelmättömyys ihmisillä. Mutta jo vuosi virallisen kiellon jälkeen, Food and Drug Administration (FDA) ja Yhdysvaltain maatalousministeriö tutkivat yksityiskohtaisesti, että yli 200 000 nautaa injektoitiin laittomasti DES: ään kaikkialla maassa. Tätä lääkettä käytetään edelleen laillisesti lihakarjan kasvatuksessa Meksikossa, josta eläimet viedään sitten Yhdysvaltoihin..

Vaikka DES olisi kielletty, lihateollisuudessa ei ole pulaa hyväksytyistä hormonaalisista kasvun stimulanteista. Joten tästä päivästä lähtien melengestroliasetaattia (MGA, joka antaa painonnousua 6 prosenttia tehokkaammin kuin kielletty DES), zeranolia, progesteronia, testosteronipropionaattia, furatsolidonia, trinitro-4-hydroksifenyyliarseenihappoa, natriumarsanilaattia ja tylosiinifosfaattia käytetään laajasti.... Arseeni, toinen pahamaineinen karsinogeeni, lisätään eläinten rehuihin erilaisissa arseeniyhdisteissä, joita käytetään myös kasvunedistäjinä. Lisäksi arseeni on osa desinfiointiliuoksia, joihin eläimet "kastetaan" punkkien ja muiden loisten poistamiseksi.

Monet huumeet ovat kiellettyjä Venäjän federaatiossa ja Euroopan unionin maissa, koska niiden käyttö karjanhoidossa ja siipikarjan kasvatuksessa johtaa näiden aineiden kertymiseen eläintuotteisiin. Heidän joukossa:

Stilbeneenit, jotka sisältävät dietyylistilbestrolia, dienoestrolia ja heksoestrolia, ovat erittäin tehokkaita synteettisiä anabolisia steroideja, joilla on voimakas estrogeeninen aktiivisuus. Stilbeneillä on osoitettu olevan voimakkaita syöpää aiheuttavia ominaisuuksia..

Etinyyliestradioli on synteettinen hormonin kaltainen aine, jolla on estrogeenistä vaikutusta.

Testosteroni on endogeeninen miespuolinen (androgeeninen) sukupuolihormoni, jolla on anabolisia vaikutuksia. Testosteronia tuotetaan urosgonadeissa ja se on välttämätöntä lisääntymisjärjestelmän normaalille toiminnalle, toissijaisten seksuaalisten ominaisuuksien muodostumiselle. Jatkuva testosteronituotanto alkaa murrosiän aikana ja jatkuu seksuaalisen toiminnan sukupuuttoon asti. Testosteroni stimuloi proteiinisynteesiä kehossa, ja tämä puolestaan ​​johtaa ruumiinpainon, erityisesti lihasten, lisääntymiseen. Testosteronin systemaattinen käyttö eläimen lihasmassan kasvun stimuloimiseksi on kielletty sekä Venäjän federaatiossa että Euroopan maissa. Eksogeenisen testosteronin on osoitettu aiheuttavan riskejä ihmisten terveydelle, mukaan lukien eturauhassyöpä

Metyylitestosteroni on synteettinen anabolinen steroidi, jolla, kuten testosteronilla, on androgeenista vaikutusta. Metyylitestosteronia määrätään miehille, joilla on seksuaalista alikehitystä, verisuoni- ja hermostohäiriöitä. Lääkkeen käyttö sopivilla indikaatioilla ja sopivina annoksina johtaa seksuaalisen toiminnan lisääntymiseen, alikehittyneiden sukupuolielinten kasvun stimulointiin ja toissijaisten seksuaalisten ominaisuuksien kehittymiseen. Lääkettä suositellaan myös miehille, joilla on impotenssi ylityön vuoksi, ja naisille, joilla on metriitti ja vaginiitti. Metyylitestosteronin käyttö karja- ja siipikarjatuotannossa johtaa sen kertymiseen eläinperäisiin tuotteisiin ja on kielletty Venäjän federaatiossa ja Euroopan unionin maissa..

19-nortestosteroni on synteettinen anabolinen steroidi, jolla on androgeenista vaikutusta. Joitakin 19-nortestosteroniestereitä käytetään eläinlääketieteessä käyttöaiheiden mukaan lääkinnällisiin tarkoituksiin, mutta 19-nortestosteronin systemaattinen käyttö eläinten lihasmassan kasvun stimuloimiseksi on kielletty Venäjän federaatiossa ja Euroopan unionin maissa..

Klenbuteroli kuuluu b-agonisteiksi kutsuttujen aineiden ryhmään. Β-agonistien tiedetään stimuloivan lihasmassaa ja säätelevän rasva- ja lihaskudoksen suhdetta kasvatettaessa tuotantoeläimiä ja siipikarjaa. On todistettu, että klenbuteroli ja muut β-agonistit voivat ruoan kanssa käytettynä aiheuttaa takykardian ja verenpaineen jyrkän nousun. Klenbuterolin ja muiden b-agonistien kroonisen saannin myötä ihmiskehossa voidaan havaita aineenvaihduntahäiriöitä.

Zeranoli on erittäin tehokas synteettinen anabolinen aine, jolla on estrogeenisiä ominaisuuksia. Mykotoksiinitereralenonilla, jota joskus kutsutaan "kasvihormoniksi", on kolme kertaa vähemmän estrogeenista aktiivisuutta kuin synteettisellä zeranolilla. Anabolisten ominaisuuksiensa vuoksi zeranolia käytetään laittomasti karjanhoidossa lihasten kasvun stimuloimiseksi ja rehun imeytymisen parantamiseksi. Zeranoli voi aiheuttaa merkittävän riskin ihmisten terveydelle. Zeranoli pääsee ihmiskehoon eläintuotteilla, ja se voi aiheuttaa lasten ja nuorten hyperestrogenismin, hedelmättömyyden ja kehityshäiriöiden kliinisiä oireita. Zeranolin käyttö karjanhoidossa on kielletty.

Trenboloni on erittäin tehokas synteettinen anabolinen steroidi, jolla on myös vahva androgeeninen aktiivisuus. Trenboloni indusoi solujen transformaatiota ja voi aiheuttaa riskin ihmisten terveydelle. Trenbolonin käyttö karjankasvatuksessa ja siipikarjan kasvatuksessa johtaa sen kertymiseen eläintuotteisiin ja on kielletty sekä Venäjän federaatiossa että Euroopan unionin maissa..

Eläinlääkkeiden jäämien määrittämiseksi käytetään instrumentaalisia fysikaalis-kemiallisia analyysimenetelmiä, kuten korkeapaineinen nestekromatografia (HPLC) ja kaasukromatografia-massaspektrometria (GC-MS). Nämä menetelmät edellyttävät kuitenkin kalliiden laitteiden käyttöä, jotka vaativat erittäin ammattitaitoista huoltoa. Viime aikoina eläinlääkkeiden jäämien seulomiseksi on käytetty kätevää ja nopeaa entsyymiin liittyvää immunosorbenttimääritystä (ELISA), joka on virallinen menetelmä eläintuotteiden valvomiseksi EU-maissa (direktiivi 93/257 / ETY). Venäjän federaation maatalousministeriön eläinlääkintävirasto hyväksyi helmikuussa 2000 ohjeet seitsemän tärkeimmän synteettisen hormonaalisen valmisteen kvantitatiiviseen määrittämiseen eläinperäisissä elintarvikeraaka-aineissa RIDASCREEN®-testijärjestelmien avulla.

Elintarvikeraaka-aineiden ja eläinperäisten elintarvikkeiden, joita myydään EU-maissa ja Venäjän federaatiossa, on oltava täysin vapaita hormonaalisten lääkkeiden, beeta-agonistien ja joidenkin antibioottien (esimerkiksi kloramfenikolin ja nitrofuraanien) jäämistä. Terapeuttisiin tarkoituksiin käytettäviä eläinlääkkeitä olisi käytettävä edellyttäen, että eläimet vanhenevat pakollisesti ennen teurastusta, kunnes eläinlääkkeiden jäännökset poistuvat kokonaan eläimen kehosta..

2. Ohjeet hormonaalisten jäännösmäärien määrittämiseksi eläintuotteista GLC-menetelmällä

1. YLEISET SÄÄNNÖKSET

Elintarvikkeita voidaan saastuttaa erilaisina lääkkeinä käytettävillä hormonaalisilla lääkkeillä (HP) sekä lisätä eläinten ja siipikarjan lisääntymistä ja tuottavuutta..

Monilla hormoneilla on voimakas anabolinen aktiivisuus - kyky stimuloida kudosten nopeutettua kasvua ja proteiinisynteesiä kehossa. Hormonaalisten valmisteiden (HP), niiden analogien ja johdannaisten käytön seurauksena maataloudessa havaittiin näiden aineiden jäännösmäärät lihassa, lihatuotteissa, maidossa, maitotuotteissa ja munissa. HP sisältää joitain polypeptidi- ja proteiinihormoneja (insuliini, somatotropiini jne.), Aminohappojohdannaisia ​​- kilpirauhashormoneja sekä steroidihormoneja ja niiden analogeja.

HP: n saastuttamien elintarvikkeiden järjestelmällinen käyttö on syynä erityyppisiin allergisiin reaktioihin, dysbakterioosiin ja muihin häiriöihin. Siksi on tarpeen seurata jatkuvasti HP: n jäännösmääriä ruoassa..

Tähän asiaan kiinnitetään asianmukaista huomiota monissa maissa, sitä on toistuvasti pohdittu konferensseissa, monien maiden hallitusohjelmissa ja FAO / WHO: n asiantuntijat. Sekä entinen Neuvostoliiton jälkeinen tila että Valkovenäjän tasavalta eivät kuitenkaan käytännössä kontrolloi elintarviketuotteiden valtionyrityksiä. Tämä johtuu ensisijaisesti käytettävissä olevien tutkimusmenetelmien ja sopivien laitteiden puutteesta. Tältä osin kehitettiin ohje normalisoitujen hormonien (diotilstilbtetroli, testosteroni, estradnol-17v) jäännösmäärien määrittämiseksi eläintuotteista yhdestä näytteestä kaasukromatografialla HP: n jäännösmäärien (AR) säätämiseksi elintarvikkeissa.

Steroidit sisältävät erittäin tärkeitä luontofysiologisesti aktiivisten yhdisteiden luokkia - sukupuolihormonit ja lisämunuaisen kuoren hormonit, sterolit, sappihapot, sapogeniinit, sydämen aglykonit, lukuisat alkaloidit jne..

Sukupuolihormoneja ovat:

- luonnon estrogeenit, 18 hiiliatomia sisältävät naissukupuolihormonit (C18-steroidit) ja niihin sekoitetut esimerkiksi estralnol-17b ja synteettiset ei-steroidiset estrogeenit, esimerkiksi dietyylistilbestroli;

- luonnolliset androgeenit - miespuoliset sukupuolihormonit, jotka sisältävät 19 hiiliatomia (C19-steroidit) ja niiden johdannaiset, esimerkiksi testosteroni;

- ja luonnolliset progestogeenit, jotka sisältävät 21 hiiliatomia (C21-steroidit), ja niiden johdannaiset, kuten progesteroni.

Kaikkia sukupuolihormoneja voidaan pitää kolesterolin analogeina, niiden molekyylissä on "steroidiryhmä": yksi viisijäseninen ja 3 kuusijäseninen hiilirengas.

Estradioli -17v (1,3,5-estratrieeni-3,17v-dioli) on tärkein naissukupuolihormoni. Se on kemiallinen yhdiste, jonka sulamispiste on 178 ° C; liukenematon veteen. Liukenee alkalisessa vesiliuoksessa, alkoholeissa, asetonissa.

Dutilstilbestroli (trans-4,4'-dihydroksn-b, v-dietyylistilbene) - DES, synteettinen hormonaalinen lääke, jonka sulamispiste on 169-172 ° C, liukenee laimennettuihin alkalien, asetonin, eetterin, kloroformin, alkoholien, kasviöljyn vesiliuoksiin, liukenematon veteen.

Testosteroni (4-androsten-17v-ol-3-oni), tärkein miespuolinen sukupuolihormonihormoni, on kemiallinen yhdiste, jonka sulamispiste on 155 ° C. Liukenematon veteen, liukenee alkoholeihin, eetteriin, moniin orgaanisiin liuottimiin, kasviöljyihin.

1.2. Amalis-periaate

Ehdotettu analyysi on suunniteltu vapaan ja konjugoidun dietyylistilbsetrolin määrittämiseksi. testosteroni ja estradnol-17b lihassa, sisäelimissä ja maidossa. Se perustuu hormonien uuttamiseen lihan, sivutuotteiden tai maidonäytteestä polaarisilla liuottimilla, hormoni-konjugaattien tuhoamisella suolahapolla, pesemisellä suolahapolla, näytteen puhdistamisesta jakamalla uudelleen kahden sekoittumattoman nesteen välillä, sitten adsorptiokromatografiapylvääseen silikageelillä ja С18polarplus-patruunaan, jossa on happamaisen vedyn muutos kaasukromatografinen määritys elektronin sieppausdetektorilla ja puolipolaarisella kapillaarikolonnilla, jossa on silikoninestefaasi HP-50. Mittauksen alaraja käytettäessä kaasu-nestekromatografiaa elektroninsieppausdetektorin kanssa on 0,3 ng DES: lle; 0,5 ng testosteronia ja 0,6 ng estradioli-17b: tä 2 μl: n injektiona. Suhteellinen kokonaismittausvirhe hyväksytyllä luotettavuustasolla P = 0,95 ei ylitä ± 18-20%.

2. NÄYTTEENOTTO JA NÄYTTEIDEN VASTAANOTTO II VARASTOINTI LABORATORIOSSA. NÄYTTEIDEN Eristäminen analyysia varten

Näytteet kvantitatiivista määritystä varten otetaan elintarvikkeiden pintakerroksista 5-10 varastointipaikasta. Kussakin varastointipaikassa otetaan 100-200 g tuotetta pintakerroksista näytteenottimella, veitsellä tai lusikalla. Homogeeniset tuotteet sekoitetaan kokonaisnäytteeseen, jonka paino on 1,0-1,5 kg. Näytteet voidaan sijoittaa purkkeihin, joissa on kansi tai muovipussit, jälkimmäiset ovat hermeettisesti sidottuja.

Laboratoriossa otettu näyte on pidettävä mahdollisuuksien mukaan samassa lämpötilassa, jossa ruokaa pidettiin näytteitä otettaessa. Kokonäyte murskataan perusteellisesti, sekoitetaan ja siitä otetaan tarvittava punnittu osa.

3. DNETPLSTYYLIBESTROLIN, TESTOSTERONI II: N, ESTGLDIOL-17c: N MÄÄRITTÄMINEN ELÄINTUOTTEISSA KAASUNESTEEN KROMATOGRAAFISESTI

3.1. Reagenssien valmistus analyysiä varten

Hormonien kantastandardiliuokset valmistetaan konsentraatiolla 1000 μg / ml, josta punnitaan 0,0500 g kutakin hormonia, siirretään kvantitatiivisesti 50 ml: n mittapulloon ja saatetaan merkkiin metanolilla. Varastohormonistandardiliuoksia säilytetään jääkaapissa 2-3 kuukautta.

Sitten valmistetaan työliuokset, joiden konsentraatio on 1 μg / ml, hormonien kantaliuosstandardiliuoksista, joille jokaisesta kantastandardiliuoksesta otetaan mikroruiskulla 50 μl, siirretään kvantitatiivisesti 50 cm3: n mittapulloihin ja säädetään merkkiin metanolilla. Toimivia hormoniliuoksia säilytetään jääkaapissa 3-4 viikkoa.

Fosfaattibuffetin valmistaminen

17,79 g Na2HPO4 liuotetaan veteen 100 cm3: n mittapulloon; Liuotetaan 13,61 g KH2PO4: a veteen 100 cm3: n mittapulloon. Sitten 12 cm3 Na2HPO4-liuosta siirretään 100 cm3: n mittapulloon ja säädetään merkkiin KH2PO4-liuoksella..

3.2. Analyysin edistyminen

Hormonijäämien uuttaminen lihatuotteista

10 g huolellisesti hienonnettua jauhelihaa laitetaan nopeaan sekoittimeen ja homogenoidaan 25 ml: aan tislattua vettä 2 minuutin ajan. Homogenaatti siirretään tasapohjaiseen pulloon, lisätään 50 ml dietyylieetteriä ja sisäisten standardien työliuoksia, joiden konsentraatio on 1 μg / cm3 (20 μl 4,4'-dihydroksidifenyyli - DDF ja 50 μl 17b-metyylitestosteronia). Hormonit uutetaan ravistimessa 30 minuutin ajan. Laskeutumisen jälkeen eetterikerros kerätään punnittuun pyöreäpohjaiseen pulloon vedettömällä natriumsulfaatilla varustetun suodattimen läpi. Dietyylieetteriuutto toistetaan vielä kerran. Liuotin tislataan pois ja pullo punnitaan. Määritä uuttamisen aikana vapautuvien tähteiden massa.

Hormonikonjugaattien tuhoaminen

5-10 ml dietyylieetteriä ja noin 1 ml väkevää kloorivetyhappoa lisätään kuivaan jäännökseen pH-arvoon 1-2. Liuotin tislataan pois kuumennettaessa kiertohaihduttimessa. Loput pyöreäpohjaisesta pullosta siirretään erotussuppiloon, johon lisätään 100 ml tislattua vettä ja 15 g ammoniumsulfaattia. Hormonit uutetaan kloroformilla 25 ml: n annoksina 3 kertaa. Kloroformi kerätään vedettömän natriumsulfaatin suodattimen läpi punnittuun pyöreäpohjaiseen pulloon, liuotin tislataan pois pyöröhaihduttimella. Punnitaan pullo jäännöksellä, määritetään jäännöksen massa.

Uutteen puhdistus jakamalla se uudelleen kahden sekoittumattoman nesteen välillä

Valmistetaan asetonitriilillä kyllästetty heksaani ja heksaanilla kyllästetty asetonitriili. Tätä varten yhtä suuret määrät heksaania ja asetonitriiliä laitetaan erotussuppiloon, ravistetaan 2-3 minuuttia, annetaan laskeutua ja sitten kerrokset erotetaan. Pyöreäpohjaisen pullon rasvajäännös siirretään erotussuppiloon käyttämällä 15 ml asetonitriilillä kyllästettyä heksaania, 25 ml heksaanilla kyllästettyä asetonitriiliä. Ravista, laske kerrokset läpinäkyviksi. Asetonitriilikerros erotetaan toiseen erotussuppiloon, lisätään jälleen 15 ml asetonitriilillä kyllästettyä heksaania ja seosta ravistetaan. Asetonitriilikerros kerätään punnittuun pyöreäpohjaiseen pulloon, liuotin tislataan pois, pullo punnitaan.

Uutteen puhdistaminen kromatografiakolonnissa silikageelillä

Kromatografiakolonnin mitat ovat: halkaisija -1 cm, pituus - 20 cm.

Pane kolonnin alaosaan bentseenillä ja vedettömällä natriumsulfaatilla kostutettu puuvilla. 5 g silikageeliä punnitaan lasissa, sekoitetaan 25 ml bentseenin ja tämän seoksen kanssa

täytä sarake. Pylvästä suojataan 5 minuuttia, hieman vedetöntä natriumsulfaattia sekoitetaan päälle. Ota uutteen ottamiseksi 25 ml bentseeniä. Liuotetaan 1 ml: aan bentseeniä ja kun pylväs sisältää noin 5 mm bentseeniä silikageelin päällä, lisätään näyte. Sitten pullo huuhdotaan vielä kaksi kertaa 1 ml: lla bentseeniä ja levitetään uudelleen pylvääseen. Loput bentseenistä, huuhtelemalla kylmäpohjainen pullo näytteellä, levitetään pylvääseen suurempina osina. Liuottimen virtausnopeus on 1 pisara sekunnissa. Hormonit eluoidaan 50 ml: lla bentseeni-asetoni-seosta 9: 1. Eluaatti kerätään pyöreäpohjaiseen pulloon ja liuottimet poistetaan pyöröhaihduttimella. Jäännökset punnitaan. Jos jäännöksen massa on yli 50 - 100 mg, näyte puhdistetaan kiinteäfaasiuutolla.

Ensimmäisen rinnalla valmistetaan toinen näyte 10 g: sta jauhelihaa. Ennen uutteiden haihduttamista kromatografiakolonnissa puhdistamisen jälkeen yhdistetään kaksi näytettä. Siten näytteen paino on 20 g..

Näytepuhdistus kiinteäfaasiuutolla

Ota C18polarplus-patruunat. Kasetin aktivoimiseksi se pestään kahdesti 6 ml: lla metanolia, kahdesti 6 ml: lla tislattua vettä. Näyte levitetään patruunaan käyttämällä 0,5 ml metyylialkoholin ja 4 ml veden seosta. Seuraavaksi patruuna pestään 3 ml: lla vettä; 3 ml metanolin ja veden seosta 55:45; 1,5 ml heksaania, hormonit eluoidaan 3 ml: lla metanolia. Näyte siirretään 5 ml: n erlenmeyerpulloon, liuotin huuhdellaan typellä. Näyte on valmis asylointiin ja myöhempien jäännöshormonien kaasukromatografiseen määritykseen.

Jäännöshormonien uuttaminen maidosta

50 g maitoa laitetaan erotussuppiloon, lisätään 20 μl DDF: tä ja 50 μl 17b-metyylitestoteronia (liuospitoisuus 1 μg / cm3), lisätään 10 ml kyllästettyä natriumkloridiliuosta ja kaliumoksalaattia, ravistetaan. Lisää 200 ml asetonia ja ravista 2 minuuttia. Lisää sitten 200 ml kloroformia ja ravista uudelleen 2 minuutin ajan. Ylempi vaihe heitetään pois. Pohja siirretään pyöreäpohjaiseen pulloon ja liuotin haihdutetaan kuiviin. Jäännökseen lisätään 5-10 ml dietyylieetteriä ja noin 1 ml väkevää kloorivetyhappoa pH-arvoon 1-2, ja hormonikonjugaatit tuhotaan. Muut menetelmät uutteiden puhdistamiseksi ovat samanlaisia ​​kuin lihavalmisteille kuvatut. Samanaikaisesti valmistetaan toinen näyte, jossa on 50 g maitoa, näytteet yhdistetään, kuten lihavalmisteiden tapauksessa, puhdistamisen jälkeen kromatografiakolonnissa silikageelillä. Siten näytteen paino on 100 g..

Näytteen asylointi ja standardit

Pulloon asetettujen standardien kuivaan seokseen (DDF, dietyylistilbestroli, 17b-metyylitestosteroni, testosteroni, estradioli-17c) ja lisätään näytteeseen 50 μl bentseeniä, 30–40 mg natriumbikarbonaattia, joka on juuri lämmitetty kuivauskaapissa 105 ° C: ssa, ja 50 μl heptafluorivoihappoanhydridiä happo. Injektiopullot suljetaan teflonitulpilla ja asetetaan termostaattiin 30 minuutiksi 70 ° C: seen. Sen jälkeen pullot poistetaan termostaatista, jäähdytetään huoneenlämpötilassa ja teflonitulpat korvataan lasisilla. Lisää noin 1 ml bentseeniä injektiopulloihin.

Reaktiotuotteet pestään 1 M fosfaattipuskurilla, jonka pH on 6, joka on saatu KH2PO4- ja Na2HPO4-suolojen seoksesta 10-15 ml: n erotussuppilossa. Lisää ensin suppiloon 3-4 ml puskuria, sitten asyloitu näyte tai standardien seos.

Pullot huuhdellaan toisella 1-2 ml: lla bentseeniä, joka lisätään myös erotussuppiloon. Kerrosten erotuksen jälkeen alempi heitetään pois ja ylempi suodatetaan kuivausaine- vedettömän natriumsulfaattikerroksen läpi kartiomaisiin 5 ml: n pulloihin vedetyllä kärjellä, bentseeni haihdutetaan typpivirrassa, sitten lisätään 20 μl bentseeniä. Sen jälkeen 2 μl näytettä tai standardien seosta injektoidaan kaasukromatografiin.

3.3. Instrumentin valmistelu, kromatografiapylväs, detektorin kalibrointi, mittausten suorittaminen

Valmistautuminen mittausten tekemiseen

Ennen mittausten suorittamista tulee suorittaa seuraavat työt: mittauslaitteiden valmistelu, liuosten valmistus, kalibrointiominaisuuksien määrittäminen, näytteiden valinta ja valmistelu analyysiä varten.

Mittauslaitteiden valmistelu

Kytke kromatografi päälle käyttöohjeen mukaisesti. Vakautetaan kromatografin toiminta lämpötilassa 130 ° C, kunnes lähtötaso laskeutuu 5 prosenttiin tallentimen asteikon pituudesta 1 tunnin ajan herkkyydellä, joka vastaa pienintä havaittavaa pitoisuutta.

Tämän tekniikan mukainen analyysi tulisi suorittaa ohjeiden "Kemiallisten laboratorioiden turvallisen työn perustiedot", - M., Chemistry, 1979, ja kaasu-nestekromatografin käyttöä koskevien ohjeiden mukaisesti..

Operaattorin pätevyysvaatimukset

Henkilöt, joilla on ylempi korkeakoulu- tai keskiasteen koulutus tai keskiasteen koulutus, tuntevat kaasukromatografian perusteet, joilla on kokemusta analyyttisestä laboratoriosta vähintään vuoden ajan ja jotka ovat perehtyneet turvallisuusvaatimuksiin ja tähän käsikirjaan, voidaan antaa suorittaa mittauksia.

Mittausolosuhteet

Suoritettaessa mittauksia laboratoriossa standardin GOST 15150-69 mukaisesti, seuraavien ehtojen on täytyttävä:

-ilman lämpötila 20 ± 5 ° С;

-ilmanpaine 84,0-106,7 kPa (630-800 mm Hg);

-ilman kosteus enintään 80% lämpötilassa 25 ° С;

-syöttöjännite 220 ± 22 V;

-Vaihtotaajuus -50 ± 1 Hz.

Kalibrointiliuosten valmistus

Hormonijohdannaisten kalibrointiliuosten saamiseksi heptafluorivoihappoanhydridillä vastaavat määrät hormoneja laitetaan 5 ml: n pulloon ja metyylialkoholi haihdutetaan typellä. Sitten lisätään bentseeniä, bikarbonaattia, natriumia, heptafluorivoihappoanhydridiä, suljetaan vialuteflonitulpalla ja asetetaan termostaattiin 70 ° C: seen 30 minuutiksi. Sitten injektiopullo jäähdytetään, korkki korvataan lasisella. Noin 1 ml bentseeniä lisätään injektiopullon sisältöön. Reaktiotuotteet pestään 1 M fosfaattipuskurilla, jonka pH on 6, joka on saatu KH2PO4- ja Na2PO4-suolojen seoksesta 10-15 ml: n erotussuppilossa. Lisää ensin suppiloon 3-4 ml puskuria, sitten standardien asyloitu seos.

Injektiopullo huuhdellaan uudella 1 ml: lla bentseeniä, joka lisätään myös erotussuppiloon. Kerrosten erottamisen jälkeen alempi heitetään pois ja ylempi suodatetaan kuivausainekerroksen läpi vedettömästä natriumsulfaatista 5 ml: n kartiomaisessa pullossa, jossa on pidennetty kärki, bentseeni haihdutetaan typpivirrassa, sitten lisätään 20 μl bentseeniä. Sen jälkeen 2 μl standardien seosta injektoidaan kaasukromatografiin.

Valmistetaan viisi kalibrointistandardiliuosta. Liuoksen nro 1 saamiseksi ampulliin lisätään eriä työskentelystandardiliuoksia, joiden konsentraatio on 1 μg / cm3; 4 μl DDF, 2 μl DES, 12 μl 17b-metyylitestosteronia, 15 μl testosteronia ja 5 μl estradioli-17c. Metanolin haihduttamisen jälkeen injektiopulloon lisätään 30 μl bentseeniä, 10-20 mg natriumbikarbonaattia ja 30 μl heptafluorivoihappoanhydridiä..

Liuoksen nro 2 saamiseksi pulloon lisätään 8 ui DDF: ää, 4 ui DES: ää. 24 μl 17b-metyylitestosteronia, 30 μl testosteronia ja 10 μl estradioli-17c. Metanolin haihduttamisen jälkeen pulloon lisätään 50 μl bentseeniä, 10-20 mg natriumbikarbonaattia ja 50 μl heptafluorivoihappoanhydridiä..

Liuoksen nro 3 saamiseksi pulloon lisätään 16 μl DDF: ää, 8 μl DES: ää, 48 μl 17b-metyylitestosteronia, 60 μl testosteronia ja 20 μl estradioli-17v: tä. Metanolin haihduttamisen jälkeen injektiopulloon lisätään 70 μl bentseeniä, 20-30 mg natriumbikarbonaattia ja 70 μl heptafluorivoihappoanhydridiä..

Liuoksen nro 4 saamiseksi pulloon lisätään 32 μl DDF: ää, 16 μl DES: ää, 96 μl 17b-metyylitestosteronia, 120 μl testosteronia ja 40 μl estradioli-17v: tä. Metanolin haihduttamisen jälkeen injektiopulloon lisätään 80 μl bentseeniä, 20-30 mg natriumbikarbonaattia ja 80 μl heptafluorivoihappoanhydridiä..

Liuoksen nro 5 saamiseksi pulloon lisätään 48 μl DDF: ää, 24 μl DES: ää, 144 μl 17b-metyylitestosteronia, 130 μl testosteronia ja 60 μl estradlol-17v: tä. Metanolin haihduttamisen jälkeen injektiopulloon lisätään 100 μl bentseeniä, 30-40 mg natriumbikarbonaattia ja 100 μl heptafluorivoihappoanhydridiä..

Jokainen kalibrointiliuos kromatografoidaan 6 kertaa.

Kromatografiset analyysiolosuhteet

Kromatografiin lisätyn näytteen tilavuus 2 μl

Kantajakaasun paine 118 kPa

pylväsuuni nopeudella 5 ° / mnnot 130-300 ° С

Kapillaarikromatografiakolonni silikonipaidalla, HP-50-vaihe, pituus 30 m, sisähalkaisija 0,25 mm, vaiheen paksuus 25 mm.

Standardien heptafluoriilijohdannaisten retentioajat (min):

Kalibrointikäyrän kaltevuus määräytyy laitteen kalibrointikertoimen avulla, joka lasketaan kaavalla (1):

Ki, - laitteen kalibrointikerroin hormonijohdannaisten ja heptafluorivoihappoanhydridin seoksen 1. komponentille;

Hormonijohdannaisten ja heptafluorivoihappoanhydridin seoksen 1. komponentin piikkien pi-pinta-ala, saatu kromatografialla, mm2 laskettaessa signaalialuetta tallentimessa tai suhteellisia yksiköitä käytettäessä tietokonesignaalinkäsittelyjärjestelmää.

Сist - ensimmäisen standardin määrä hormoniseoksessa 2 μl bentseenissä, μg.

Mitataan yksittäisiä hormonijohdannaisia ​​vastaavat piikkialueet. Hormonijohdannaisten seoksen 1. komponentin kalibrointiominaisuuksien määrittämiseksi lasketaan hormonijohdannaisten seoksen kuuden rinnakkaisen mittauksen tulosten keskiarvo..

Näyteanalyysi suoritetaan seuraavasti. Määritä piikkialueet tietokoneistetun signaalinkäsittelyjärjestelmän avulla tai suorita pinta-alan laskelmat

huiput tavanomaisin menetelmin rekisteröidessään signaalin tallentimeen. Jokainen näyte kromatografoidaan vähintään 6 kertaa..

Mittaustulosten käsittely

Hormonien massapitoisuus näytteessä lasketaan kaavalla:

Ci- yksittäisen komponentin pitoisuus hormoniseoksessa, mg / kg tuotetta;

Si on hormoniseoksen yksittäisen komponentin piikin pinta-ala, mm2 laskettaessa tallentimen signaalialuetta tai suhteellisia yksiköitä käytettäessä tietokonesignaalinkäsittelyjärjestelmää.

M on analyysia varten otetun näytteen massa, g;

V on bentseeniuutteen tilavuus, μl;

Ki on laitteen kalibrointikerroin hormoniseoksen yksittäiselle komponentille;

n on laitteeseen tuotavan uutteen määrä, μl.

Analyysitulokseksi otetaan kahden vastaavan hormonipitoisuuden määrityksen aritmeettinen keskiarvo, joka saadaan vastaavien piikkien pinta-alojen kahdesta rinnakkaismäärityksestä..

Kahden rinnakkaismittauksen sallittu ero luottamustasolla p = 0,95 ei saa ylittää 20%.

Kalibrointiominaisuuksien vakauden hallinta koostuu kalibrointikäyrän parametrien määrittämisestä vähintään kerran kuukaudessa, niiden vertailusta alkuperäisiin parametreihin ja tämän perusteella mahdollisuuden jatkaa virtamittauksia tai tarpeen korjata kalibrointiominaisuuksia.

Kontrollivälineet ovat modifioitujen hormonien kalibrointiliuoksia. Mittaustulokset eivät saa poiketa enempää kuin 10% kalibroinnilla saaduista tuloksista.

3. Kemialliset menetelmät hormonien havaitsemiseksi ja tunnistamiseksi ohutkerros- ja paperikromatogrammeilla ja elektroforamareilla

Proteiinihormoneille

Reagoi mustamidin kanssa.

1. Valmista 0,02% mustamidi 10 B: n liuos metanolin ja etikkahapon seoksessa (9: 1). Suodatettu. Elektroforeesin jälkeen paperiliuska asetetaan 10 minuutiksi väriliuokseen, jonka jälkeen se pestään toistuvasti etikkahapon 10-prosenttisella vesiliuoksella tai metanolin ja etikkahapon seoksella (9: 1)..

2. 0,3 g amidimusta liuotetaan 100 ml: aan 7-prosenttista etikkahappoa, joka sisältää 30 ml metanolia. Suodatettu. Elektroforeesin jälkeen polyakryyliamidigeeli upotetaan väriliuokseen 2-3 tunniksi, ylimääräinen väriaine poistetaan pesemällä pitkään 7-prosenttisessa etikkahapossa, toisinaan käyttämällä lempeä elektroforeesi.

Reagoi kumasin kanssa kirkkaan kirkkaan sinisenä. Sitä käytetään elektroforeesin jälkeiseen värjäykseen polyakrymilaanigeelissä. Geeli kiinnitetään 20 -%: iseen sulfosalisyylihapon vesiliuokseen 15-18 tunnin ajan, sitten siirretään 2-4 tunniksi (riippuen geelin konsentraatiosta) kirkkaan sinisen kumasin 0,25-prosenttisessa vesiliuoksessa ja 3-5 kertaa pestiin 7-prosenttisella etikkahappoliuoksella. Fiksaattorin ja huuhtelunesteen tilavuuden on ylitettävä geelin tilavuus vähintään kymmenen kertaa.

Peptideille, aminohappojohdannaisille ja bogeenisille amiineille

Reaktiot ninhydriinin kanssa.

1. Kromatogrammi kostutetaan tuoreella 1-prosenttisella ninhydriiniliuoksella asetonissa. Kuivumisen jälkeen se asetetaan pimeään 40 tunniksi lasiastiaan, jonka pohjassa on lasi väkevää suolahappoa..

2. Kromatogrammi kostutetaan seoksella, jossa on 1-prosenttinen ninhydriiniliuos asetonissa (100 ml), 1-prosenttinen kadmiumasetaattiliuos vedessä (10 ml) ja 5 ml etikkahappoa. Kahden tunnin ilmakuivauksen jälkeen pimeässä suurin väri kehittyy (punainen).

3. Valmista ratkaisut:

a) 0,1 g ninhydrippiä 50 ml: ssa absoluuttista etanolia, 10 ml jääetikkaa ja 2 ml kollidiinia;

b) 0,5 g kuparinitraattia 50 ml: ssa absoluuttista etanolia.

Ennen käyttöä liuokset sekoitetaan suhteessa 50: 3. Kromatogrammi sumutetaan, kuumennetaan 4 minuutin ajan 110 ° C: ssa. Väri on epävakaa.

UV-valon imeytyminen.

Kromatogrammi säteilytetään lyhytaaltoisella UV-valolla. Säteilyn lähde voi olla laite, kuten "kromatoskooppi" tai ultrakemiscop Brumberg, jossa on valosuodatin UFS-1. Kaikki b, c-tyydyttymättömät ketosteroidit, dieenit ja jotkut muut yhdisteet näkyvät tummina täplinä vaalealla pohjalla. Useimmiten tätä menetelmää käytetään D4-3-ketosteroidien havaitsemiseen. Altistuksen keston tulisi olla minimaalinen steroidien hajoamisen välttämiseksi.

Ilmentyminen jodihöyryssä.

Se on monipuolinen menetelmä orgaanisen aineen havaitsemiseksi. Kromatogrammi asetetaan suljettuun astiaan, jonka pohjassa on jodikiteitä, pidetään ilmassa 5 minuutin ajan ylimääräisen jodin poistamiseksi. Steroiditahrat muuttuvat ruskeaksi. On myös suositeltavaa suihkuttaa kromatogrammi tärkkelyksen 1-prosenttisella vesiliuoksella, kunnes sinisiä pilkkuja tulee näkyviin. Tärkkelyskäsittely ei sovellu ohutkerroskromatogrammien tutkimiseen tapauksissa, joissa tärkkelystä käytetään sideaineena.

Reaktio anisaldehydihapon kanssa.

Yleinen reaktio steroideille ja muille orgaanisille aineille. Kromatogrammi suihkutetaan anisiinialdehydin, väkevän rikkihapon ja jääetikkahappojen seoksella (0,5: 1: 50). Kun on kuumennettu 10 minuuttia 100 ° C: ssa, näkyviin tulee värillisiä pilkkuja. On suositeltavaa korvata aggressiivinen havaitseminen rikkihapolla ohutkerroskromatografialla Silufol-levyillä.

Reaktio typpihapon kanssa.

Suositellaan Silufol-levyjen käsittelyyn. Kromatogrammi suihkutetaan 65-prosenttisella typpihapolla, kuumennetaan 10 minuuttia 100 ° C: ssa. Tyydyttymättömät steroidit antavat ruskean värin.

Reaktio fosfomolybdiinihapon kanssa.

Käytetään oksysteroidien havaitsemiseen. Kromatogrammi suihkutetaan juuri valmistetulla 10-prosenttisella fosfomolybdiinihapon etanoliliuoksella, kuumennetaan 5 minuutin ajan 80 ° C: ssa..

Reaktio antimonitrikloridi - etikkahappoanhydridin kanssa

Käytetään oksysteroidien havaitsemiseen. Aldosteroni, kortisoni ja niiden asetaatit eivät tahraa. Kromatogrammi suihkutetaan antimonitrikloridin (myrkky!) Kyllästetyllä liuoksella kloroformissa (ilman etanoliseosta) ja etikkahappoanhydridissä (8: 2), pidetään uunissa 5 minuutin ajan 90-100 ° C: ssa. Näkyvässä valossa tahrat ovat seuraavat:

pregnenolone - violetti; testosteroni - sinivihreä

pregnenoloniasetaatti - fiolidihydrotestosteroni - sininen

Progesteroniasetaatti - sininen DEA - violetti

F - punaruskea DEA-asetaatti - violetti

F-asetaatti - kelta-ruskea androsteenidiooli - puna-violetti-

S-asetaatti - violetti E3 - ruskea-vihreä

B - ruskea E2 - oranssi

DOK - harmaanruskea E3 - vaaleanpunainen

Reaktio antimonitrikloridin kanssa (Ertel-reaktio).

Kun kromatogrammi on ruiskutettu kyllästetyllä antimonitrikloridiliuoksella kloroformissa (ilman etanoli-epäpuhtauksia) ja kuumennettuna 5 minuutin ajan 90--100 ° C: ssa, D5-3v-oksysteroidit antavat violetti-violetin värin. Reagenssilla on myös muita oksysteroideja, joiden väri on erilainen.

Reaktio H2SO4-etanolin kanssa (Ertel- ja Eyck-Ness-reaktio).

Kromatogrammi käsitellään juuri valmistetulla seoksella väkevää rikkihappoa ja absoluuttista etanolia (2: 1). 1-2 minuutin kuluttua kehittyy kelta-ruskea väri. Reaktio on spesifinen D5-3v-hydroksi-steroideille ja niiden asetaateille.

Fluoresoiva reaktio fosforihapon kanssa.

Kromatogrammin kostuttamisen tai suihkuttamisen jälkeen 15-prosenttisella o-fosforihapon vesiliuoksella ja 20 minuutin lämpötilassa 80-90 ° C kuumennetulla ketosteroidilla on fluoresenssi - sinisestä oranssiin.

Kromatogrammi suihkutetaan 10-prosenttisella natriumhydroksidiliuoksella 60-prosenttisessa metanolin vesiliuoksessa, kuumennetaan 10 minuuttia 80-100 ° C: ssa. UV-valossa D4-3-ketosteroidit antavat keltaisen fluoresenssin..

Reaktiot tetratsolisinisen kanssa.

Steroidit, joissa on b-ketolin sivuketju C-17: ssä (-CO-CH2OH), pelkistävät tetratsolisinisen formazaniksi, jolla on sininen väri.

1. Kromatogrammi suihkutetaan juuri valmistetulla seoksella, joka sisältää 1-prosenttista tetratsolisinisen vesiliuosta ja 2 N. kaustinen sooda metanolissa (1: 9). Pieni lämmitys (40-60 ° C) nopeuttaa värien ulkonäköä.

2. Seos kromatogrammin käsittelemiseksi koostuu 8 ml: sta 1-prosenttista tetratsolisinistä etanolissa, 12 ml: sta 4 N. seos ja 20 ml tislattua vettä. Valmistettu juuri ennen käyttöä.

Reaktio hopeanitraatin kanssa.

10 ml: aan 0,1 N. kymmenen tippaa väkevää ammoniakkia ja 5 ml 10-prosenttista natriumhydroksidiliuosta (Tollens-reagenssi) lisätään peräkkäin hopeanitraattiliuokseen. Paperiliuska kostutetaan juuri valmistetulla reagenssilla ja kuivataan ilmassa 1 minuutin ajan (älä anna taustavärin ilmestyä!). Kromatogrammi upotetaan 5-prosenttiseen hyposulfiittiliuokseen muutamaksi sekunniksi ja pestään 1-2 minuutin ajan tislatussa vedessä. Steroidit, joissa on b-ketolin sivuketju, muuttuvat ruskeaksi.

Reaktio m-dinitrobentseenin kanssa (Zimmermannin reaktio).

Suhteellisen spesifinen 17-ketosteroidille. Kromatogrammi suihkutetaan juuri valmistetulla seoksella, joka sisältää 2-prosenttista m-dinitrobentseeniliuosta etanolissa 50-prosenttisella vesipitoisella kaliumhydroksidilla (4: 1). kuumennetaan 3-5 minuuttia 50-60 ° C: ssa. Steroiditahrat muuttuvat violetiksi

Sulfaattikromogeenien spektroskopia.

2 ml väkevää rikkihappoa lisätään steroidi-eluaattien kuiviin tähteisiin (20-40 μg) ja kromatogrammin vertailulohkoon ("tyhjä"). Kahden tunnin kuluttua steroidin absorptiospektri rekisteröidään kontrollia vastaan ​​alueella 220-600 nm.

Lisää steroidi-eluaatin kuivaan jäännökseen (10-15 μg) kaksi tippaa etikkahappoanhydridiä ja neljä tippaa pyridiiniä, jätä yön yli. Kuivaa typpivirralla, lisäämällä 0,5 ml metanolia useita kertoja.

Reaktio fenyylihydratsiinin (Porter-Silber) kanssa.

Spesifinen steroideille, joissa on 17, 21-dioksi-20-ketoryhmä (17-OCS). 4 ml juuri valmistettua fenyylihydratsiinireagenssia lisätään steroidieluaatin tai sen liuoksen kuivaan jäännökseen 0,5 ml: ssa metanolia. Seosta kuumennetaan vesihauteessa 20 minuuttia 60 ° C: ssa, jäähdytetään vesijohtovedessä. Reaktion seurauksena muodostuu fenyylihydratsoneja, joiden absorptiomaksimi on 410 nm. Fenyylihydratsiinireagenssi koostuu 4,3 mg: sta fenyylihydratsiinihydrokloridihappoa, joka on kiteytetty uudelleen alkoholista, liuotettuna 10 ml: aan väkevän rikkihapon (62 ml), tislatun veden (38 ml) ja tislatun etanolin (50 ml) seosta..

4. Luettelo tärkeimmistä proteiini- ja peptidihormoneista